澄清牛瘤胃液是一种源于瘤胃液、富含促生长成分、且无菌稳定的添加剂，可广泛应用于微生物筛选、疾病防治、畜牧业发展等领域。 什么是澄清牛瘤胃液 澄清牛瘤胃液（Clarified Rumen Fluid）是从健康牛瘤胃中提取并经过特殊处理的标准化液体，属于一种富含微生物群落的天然生物基质，主要用于配制如甲烷菌、肠道厌氧菌等多种微生物培养基，pH中性，可与其他培养基成分一起进行高温灭菌处理，添加量为10%-20%，视所培养微生物种类不同而定。尤其适用于肠道菌群、瘤胃微生物的分离培养和体外模拟研究。 级别：无菌级，用于厌氧微生物培养 状态与外观：棕色至黑色液体 贮存条件：2-8°C保存 保质期：2-8°C保存2年，-20°C保存3年 试用建议：建议与培养基配制完毕后，一起灭菌使用
图1 PERFEMIKER®澄清牛瘤胃液 澄清牛瘤胃液的制备 反刍动物的瘤胃被认为是纤维素物质降解效率最高的天然场所之一，瘤胃微生物资源的开发已受到国内外研究者半个多世纪的关注。牛瘤胃是反刍动物消化系统的核心部分，包含复杂的微生物生态系统（细菌、原虫、厌氧真菌、产甲烷古菌等），通过分解植物纤维和合成代谢产物维持宿主健康。 瘤胃液的采集：动物屠宰后，将瘤胃剖开采集瘤胃液；对于安装有瘤胃瘘管的动物，可从瘘管口处采集瘤胃内容物。另外，瘤胃液也可以采用从口腔插入瘤胃管的方式采集，操作时，应注意避免插入气管中。 瘤胃液的运输：为保持瘤胃液的厌氧环境，采集后通常立即注入提前充满CO2的密封灭菌容器中。为保持与瘤胃内部相似的条件，研究者采用37~39℃恒温运输，有研究者为保持菌株的活力，采用4℃或冰浴低温运输。有研究者添加保护剂（甘油：厌氧稀释液=7∶3）于瘤胃液中，可在运输途中维持厌氧环境。 瘤胃液的处理：主要包括过滤、离心、保存和储存等步骤。瘤胃液中常含有饲料残渣、大颗粒物质等，因此通常需要通过纱布过滤以去除这些杂质。常用的过滤方法包括使用四层纱布或无菌纱布进行过滤。过滤后的瘤胃液通常需要进行离心处理，以进一步分离沉淀物和上清液。离心条件通常10000~12000 rpm，时间10~15分钟。瘤胃液的保存条件和时间取决于实验目的。部分研究建议在4℃或-80℃保存，以保持样本的活性和稳定性。 灭菌工艺：经过酸洗、高温灭菌（如121℃高压灭菌）及无菌过滤（0.22 μm滤膜），去除杂菌并保留活性微生物，得到澄清牛瘤胃液。
图2 牛瘤胃瘘管 澄清牛瘤胃液的应用领域 澄清牛瘤胃液因其独特的性质和处理工艺，在一些领域展现出广泛的应用前景。 肠道微生物分离和培养 澄清牛瘤胃液作为一种无菌稳定的培养基添加剂，可添加到基础的、或需强化的厌氧菌培养基中，为目标厌氧菌的后续体外培养提供营养、生长因子和适宜的氧化还原环境。 案例分享 代谢相关性脂肪肝病（MAFLD）是最常见的慢性肝病，成年人群的全球患病率约占25%。MAFLD包括从相对良性的代谢相关性脂肪肝（MAFL）到更具有病理学意义的代谢相关性脂肪性肝炎（MASH），在某些情况下，可进展为肝硬化和/或肝细胞癌。肠道微生物群，被发现对MASH的代谢失调和炎症有贡献。胆汁酸是宿主与肠道菌群之间关键的信号分子，通过激活法尼醇X受体（FXR）和Takeda G蛋白偶联受体5（TGR5）等多种受体，在代谢相关性脂肪性肝炎（MASH）的调控中发挥重要作用。 研究筛选出拟杆菌（Bacteroides uniformis）为3-sucCA的主要产生菌，通过基于活性的蛋白质纯化鉴定，发现该菌中一种β-内酰胺酶（命名为BAS-suc）是3-sucCA生物合成的关键酶。进一步实验表明，3-sucCA是肠腔限制性代谢物，不直接作用于胆汁酸受体FXR和TGR5，而是通过促进阿克曼氏菌（Akkermansia muciniphila）生长发挥作用。阿克曼氏菌的增加能改善肠道屏障功能、降低内毒素血症，进而通过LPS-TLR4通路缓解MASH。 澄清牛瘤胃液根据实验要求，按一定比例添加到改良的GAM（mGAM）琼脂培养基中进行细菌的分离和培养，为细菌提供必要的营养和生存条件。
图3 肠道共生菌群通过二级胆汁酸生物合成途径缓解MASH的研究思路[1] 体外消化发酵 根据Menke的方法，将澄清牛瘤胃液与人工瘤胃培养液按1:2体积比混合，制备成人工瘤胃培养液，进行体外消化试验。 案例分享 针对玉米秸秆饲料化利用不足及畜牧业蛋白饲料短缺问题，通过筛选纤维素降解菌株，优化得到黑曲霉H8固态发酵产纤维素酶的最佳条件，对杰丁塞伯林德纳氏酵母进行诱变育种，获得高产蛋白突变体M77，以玉米秸秆为底物，利用H8和M77进行混菌固态发酵生产蛋白饲料，并经浅盘发酵放大试验和体外消化试验进行验证，提高了饲料的营养价值，增加适口性，为玉米秸秆的饲料化利用提供技术支撑。
图4 体外消化试验结果[2] 通过体外消化试验探究了发酵产物的可消化性，随着消化的进行，玉米秸秆中的一些含氮物质在微生物作用下继续分解，产生氨等碱性物质，导致pH略有上升。在消化后期，随着可发酵的糖类等物质逐渐被消耗殆尽，微生物产酸速率减慢，使得pH在消化中期保持相对稳定。 参考文献 [1] Nie Q, Luo X, Wang K, et al. Gut symbionts alleviate MASH through a secondary bile acid biosynthetic pathway[J]. Cell, 2024, 187(11): 2717-2734. e33. [2] 张婷. 玉米秸秆固态发酵产蛋白饲料工艺研究[D]. 成都大学, 2025. DOI:10.27917/d.cnki.gcxdy.2025.000614. 产品地址：https://www.perfemiker.cn/product/687110.html 联系方式：4006087598 |
